常见问题

下面是使用它们的一般程序.

1. Maintain sterility: 在无菌环境中打开盘子(如.g. laminar flow hood).
2. Pre-equilibrate dishes: 用培养基孵育这些盘子. 用移液管将2-3 ml培养基移入35 mm培养皿或3-4 ml培养皿中，37℃孵育15分钟.
3. 向微孔中加入细胞悬液； 通过抽吸除去培养基，将细胞板放在玻璃表面. 将细胞悬浮液（细胞悬浮在培养基中）250µl移液管至直径10 mm的微孔中, 500µl细胞悬液倒入14mm微孔中, 或取1ml细胞悬液倒入20mm孔中. 在37°C下孵育1小时.
4. Add additional medium: 1小时后，轻轻地将盘子的剩余部分填满. 在35毫米的培养皿中加入2-3毫升，在50毫米的培养皿中加入3-4毫升.

注：在最初的一小时后，让细胞附着在玻璃表面, 为了尽量减少蒸发的影响和避免引起渗透压的变化，将盘子填满到正常水平是很重要的.

注意：对于几乎所有的显微镜应用. 1.5 .盖层厚度(e.g. Part #: P35G-1.5-… or P50G-1.5-…) is preferred.

对于某些细胞，最佳的附着和扩散需要细胞外基质涂层. 我们的聚d-赖氨酸或胶原蛋白涂层对绝大多数细胞都有效, however, 有些顾客发现有必要用他们自己的专门涂层来涂玻璃底盘子. 这些客户购买高附着力(e.g. Part #: P35G-…..-HA)盘子，并使用他们选择的涂层程序.

1. 1. 用磷酸盐缓冲盐水（PBS）和1x超纯H冲洗培养皿₂O;
2. 2. 把选定的涂料涂在盘子上. In many instances, 让涂层溶液在37°C下与玻璃保持接触18-24小时，而不让盘子变干是有益的. 对于神经元细胞，应用0.5mg /mL聚d-赖氨酸过夜，不要让盘子干燥
3.  3. 涂装完成后, 加入类似体积的培养液，将细胞置于培养液中，使玻璃表面达到预平衡. 在37°C的玻璃底皿中培养培养基15分钟. 取出培养基，然后将细胞装板.

要尝试无涂层玻璃底菜的样品，请在这里索取免费样品盒.

If necessary (e.g. 如需长期存放，可按下列程序拆卸盖盖：

1. Order Part #PDCF OS 30 （用于从玻璃底盘子上去除盖子的液体）
2. 把盘子盖翻过来.
3. Pipette 1.0毫升液体倒入倒盖.
4. 把盘子的底部放在盖子上. 确保倒盖内的液体接触盖盖底部.
5. 让盘子在室温下在液体中放置45分钟.
6. 用吸水纸巾擦干盖子底部.
7. 把盘子放在干净的表面上. 用镊子按住盖子的内边缘，将盖子与盘子分开.

注：如果遵循上述程序, PDCF OS 30液体不会接触细胞，也不会破坏盖盖上的细胞或其染色. 盖子可以移除而不会破损.

为了近似生理条件, 玻璃底皿中所含介质的温度可以通过使用显微镜级加热器和适当的级适配器来控制.

用于P35G培养皿（康宁35mm培养皿）：培养皿加热器（部分#:DH-35）, 显微镜台适配器（第#部分：sa -显微镜型）, 加热器控制器（编号：TC324-B）, 和连接器电缆（部分#:CC-28）可从华纳仪器公司获得. 有关资料可在以下网址查阅： http://www.warneronline.com/

网格覆盖层允许你参考特定的细胞，并随时间跟随它们. For instance, 单个细胞可以进行微注射, 回到培养箱, 并在多个时间点进行观察，因为每个细胞都可以通过培养皿中唯一的字母数字坐标来识别. 玻璃底盘子包含网格Bellco玻璃盖可提供. 标准栅格盘编号为第#:P35G-1部分.5-14-C-GRD and P50G-1.5-14-FGRD.

Grid size: part#的P35G-1上的网格.5-14-C-GRD and P50G-1.5-14-FGRD由520个独特的字母数字方格组成. 每个正方形的尺寸为600微米× 600微米. 线条粗细为20微米.

网格可视化： 网格应该很容易观察到使用10倍的明视场物镜. 在你定位目标细胞之后, 您可以切换到更高的放大倍率或荧光物镜. 然而，使用更高的功率或荧光物镜将无法观察到网格.

I can’t see the grid: 汇合的单层细胞通常会掩盖网格，使其难以或不可能可视化. 如果你的单元格是融合的，你可以使用P35G-1部分.5-14-CGRD-D将网格放置在培养皿外面，这样它就不受盖盖上生长的细胞的影响. To use this dish, 找到一个感兴趣的单元格，然后将焦点向下聚焦到盖子的底部以获得其坐标.

相关光电子显微镜（CLEM）： The P35G-1.5-14-C-GRD glass bottom dishes work nicely with CLEM; however, the P35G-1.5-14-CGRD-D不推荐用于CLEM，因为细胞和网格在不同的焦平面上.

凯发体育最新版最近将玻璃底多孔板添加到其玻璃底盘子产品中.

我们的菜有很多不同的名字，包括玻璃底菜, 玻璃底培养皿, 玻璃底培养皿, 玻璃底微孔碟, 玻璃底无菌培养皿, 成像碟和盖盖底碟. 不管他们叫什么, 我们的35毫米和50毫米玻璃底培养皿, 现在是我们的玻璃底多孔板, 已成为高分辨率显微成像的事实标准 in vitro cell cultures.

凯发体育最新版玻璃底盘和多孔板部件编号包括：P35G-0-10-C, P35GC-0-10-C, P35G-0-14-C, P35GC-0-14-C, P35G-0-20-C, P35GC-1.0-14-C, P35G-1.0-14-C, P35GC-1.5-10-C, P35G-1.5-10-C, P35GC-1.5-14-C, P35G-1.5-14-c, p35gcol-0-14-c, p35g-1.5-20-C, P35GCOL-1.0-14-C, P35G-1.5-14-CGRD, P35GCOL-1.5-14-c, p50g-0-14-f, p50gc-0-14-f, p50g-1.5-14-F, P50GC-1.5-14-f, p50g -2-14- f, p06g-0-20-f, p12g-0-14-f, p06g-1.0-20-F, P12G-1.0-14-F, P06G-1.5-20-F, P12G-1.5-14-f, p24g-0-13-f, p96g-1.5-5-F, P24G-1.0-13-F, P24G-1.5-13-F, P96GC-1.5-5-F.

玻璃底盘子与网格玻璃盖也可用. 部件编号包括P35G-1.5-14-CGRD, P50G-1.5-14-FGRD.

凯发体育最新版细胞培养试剂盒

凯发体育最新版细胞培养盖盖试剂盒准备使用-盖盖放置在35毫米培养皿和预消毒. 标准玻璃盖套件可在CSGK/F, CSGK/C和CSGK/N coverlip Kit配置. 这些试剂盒，特别是CSGK/F，广泛用于羊膜穿刺术检测.

1. 波长超过320纳米的入射紫外线不会产生荧光.
2. 334和365 nm的汞线不会产生自动荧光. (注：用于水银照明, 滤除波长短于313纳米的汞线，以获得最佳结果.)
3. 折射率（@ 20°C）： n_e 1.5255+/- 0.0015, n_D 1.5230, v_e 55
4. Abbe number V = 55.

对于超高分辨率显微镜技术，我们提供高公差号. 1.第5部分中指定为-0的5个盖子.170 (e.g. 玻璃底盘#:P35G-0.170-14-C).

玻璃盖的实际厚度取决于盖号./Part #, as follows:

凯发体育最新版在其玻璃底碟中使用最高质量的硼硅酸盐德国玻璃盖. 复盖属性如下：

1. 最高水解阻力（水解等级1）.
2. 优异的耐化学品性能.
3. 碱的排放量约为15 ~ 24µg NA₂O/g glass.
4. 优良的荧光显微镜性能.
5. 波长超过320纳米的入射紫外线不会产生荧光.
6. 334和365 nm的汞线不会产生自动荧光. (注：用于水银照明, 滤除波长短于313纳米的汞线，以获得最佳结果.)
7. 折射率（@ 20°C）： n_e= 1.5255+/- 0.0015,  n_d= 1.5230
8. Abbe number V_e = 55.

玻璃底盘/板的微孔深度取决于盘/板底厚度，具体如下：

1. 35毫米碟形（部件# P35G-…）：0.75-0.85 mm
2. 50mm盘（部件# P50G-…）：1.00-1.10 mm
3. 60mm盘（部件# P60G-…）：1.15-1.20 mm
4. 100mm碟形（规格# P100G-…）：0.90-1.00 mm
5. 6孔板（Part # P06G-…）：1.45-1.55 mm
6. 12孔板（部件# P12G-…）：1.45-1.55 mm
7. 24孔板（部件# P24G-…）：1.10-1.20 mm
8. 48孔板（Part # P48G-…）：1.35-1.45 mm
9. 96孔板（Part # P96G-…）：1.05-1.25 mm

注：适用于以上所列的所有菜肴/盘子, 每孔的侧壁与多孔板的塑料底相接触. 生产玻璃底碟/盘, 在每口井的底部开一个孔，形成一个“微井”.微孔的深度相当于碟/板底部的厚度, as listed above. 在玻璃底黑色96孔板和384孔板中，每个孔的侧壁直接接触玻璃盖盖底部(i.e. 未形成微井).

玻璃底盘和多孔盘的主体由聚苯乙烯制成. 因此，它们与有机溶剂的相容性有限. 请参阅化学相容性表.

The P35G-0.与P35G-1相比，170-14-C天线将改善图像质量（见下图）.用于共聚焦的任何高数值孔径物镜的5-14-C碟, fluorescence, GSDIM, dSTORM, 全内反射（TIRF）, 以及其他高数值孔径物镜. 例如，使用P35G-0进行定量测量.170-14-C碟的z分辨率为+/- 9.5%，而P35G-1的z分辨率.5-14-C碟的z分辨率为+/- 17.3% (n=5).

A
B

图：改进的z轴分辨率- 高公差玻璃盖的效果（P35G-0）.170-14-C玻璃底碟)对亚分辨率珠的成像使用：
A) P35G-0.170-14-C and B) P35G-1.5-14-C玻璃底碟.
将5µl FITC标记的175nm PS-Speck亚分辨率珠加入玻璃底皿的孔中，晾干. After drying, 加入200 ul水，使用配有Olympus UPLSAPO 60x （NA=1）的蔡司LSM510共聚焦显微镜对微珠进行成像.2)水浸物镜.

图和测量由Teemu Ihalainen博士提供. D.，芬兰于韦斯屈莱大学（2008）.

PermaCell插入板和96孔插入板是为三维器官型组织培养设计的. 细胞被植入微孔膜顶端的植入物中. 然后可以在培养液中（培养基添加到膜的基部和顶端两侧）或在气液界面（ALI）中（培养基只添加到基室(i)）进行培养.e. 培养物的顶端侧暴露在培养箱中的空气中). For many cell types, ALI培养促进细胞分化，诱导体内样细胞的形成, 三维组织特性.

PermaCell插件可与不同的膜材料选择：

a)聚四氟乙烯（PTFE），部件# CCI24-PTFE-0.4)
b)聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET），第# CCI24-PET-0部分.4)
c)聚碳酸酯(PC，零件# CCI24-PC-0.4).

所有的膜选择具有高孔隙密度(孔径0.4 µm, 1 x 10⁸ pores/cm²). 不同类型的细胞在这些膜上的表现可能不同.  如果您不确定要使用哪种类型的插入, 一个试用包，其中包含4个插入每个PTFE, PET, 可提供PC插片（part #: CCI24-trial）. Note: PTFE衬垫相对于PET和PC衬垫的一个潜在优势是PTFE膜在潮湿时是微观透明的. 因此，可以使用倒置显微镜观察在聚四氟乙烯膜上生长的细胞. 对于更高的通量测试，使用PermaCell 96孔插入板（part# CCI96-PET-0）.4 or CCI96-PET-CL-0.4). 

凯发体育最新版生产各种正常（非转换）, human cell-derived, 3-dimensional, 器官型体外组织等效物. This Web site, 凯发体育最新版.Com，致力于提供我们体外人体组织等价物的详细信息. 它们具有有丝分裂和代谢活性, 密切模仿他们的体内对应物, 结构上和生物化学上都有, 而且要保证可重复性.

凯发体育最新版还生产一系列玻璃底培养皿. 这些碟子用于共聚焦, polarized light, 荧光显微镜技术, 是活细胞显微镜应用的理想选择.

• EpiDerm, 相当于人类的表皮组织, consists of normal, 人类细胞来源的表皮角质形成细胞已培养形成多层, 人表皮的高度分化模型. EpiDerm, 也被称为重组人表皮（RhE）, 连续生产超过15年. 还有一个“未开发”的版本，表皮-201
• EpiDermFT （表皮全厚）, 相当于人的真皮/表皮皮肤，具有良好定义的, 全功能基膜.
• MelanoDerm 人体皮肤是否由角质形成细胞和黑色素细胞组成，并已培养成多层, 人表皮的高度分化模型.
• Melanoma 全层黑色素瘤皮肤模型是否由人类恶性黑色素瘤细胞组成, normal, 人源性表皮角质形成细胞与正常, 人源性真皮成纤维细胞已培养形成多层, CM恶性肿瘤不同阶段的高分化表皮伴黑色素瘤细胞.
• EpiOcular consists of normal, 人源性表皮角质形成细胞在无血清培养基中培养形成一层, squamous epithelium, 类似于人体内角膜上皮
• EpiCorneal 由正常人角膜上皮细胞培养而成的一层, 鳞状上皮，与正常的人角膜组织非常相似.
• EpiAirway consists of normal, 人细胞来源的气管/支气管上皮细胞已培养形成假分层, 高度分化的模型，与呼吸道上皮组织非常相似.
• EpiAlveolar 是否由原代人肺泡上皮细胞产生, 肺内皮细胞和成纤维细胞.
• EpiOral相当于人类的颊部（内颊），
• EpiGingival相当于人类的牙龈（牙龈）组织.
• EpiVaginal来源于人宫颈阴道外（ECV）上皮细胞.
• EpiIntestinal, 合并肠上皮细胞, paneth cell, M cells, 丛细胞与肠干细胞分化成高度分化, polarized epithelium

• 9毫米直径的单个组织，每个组织产生在一个 单孔组织培养板插入 （以12或24个带培养基的纸巾包发货）
• 单个组织直径22毫米，每个组织产生在一个 单孔组织培养板插入 （6个纸巾包，含培养基）

组织也可在24孔和96孔高通量板. 特殊配置也可用于特定组织类型(例如. 在“snapwell”培养插入物中产生的上皮气道组织（用于使用扩散室）.

每种模型都有许多凯发体育最新版. For example, our EpiDerm 体外皮肤当量用于确定和/或研究以下内容：皮肤腐蚀, 皮肤刺激（皮肤毒性）, dermal phototoxicity, 经皮吸收（药物渗透性）, 经皮给药, inflammation, gene analysis, antioxidants, metabolism, apoptosis, antimicrobial peptides, and angiogenesis.

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我们体外人体组织等效物的药理学/毒理学临床前应用包括透皮, transbuccal, transmucosal drug delivery; biocompatibility, toxicity studies; HIV, microbicide research; bioequivalence studies; lead optimization, etc.

凯发体育最新版的体外人体组织等效物在制药/tox应用的一个例子如下：在一个新的药物库经过基于生化（酶）的初级筛选和基于细胞的二级筛选后, 但在进行临床前动物研究之前, 剩余的候选药物通过体外基于人体组织的三级筛选，以确定最佳渗透性和/或最小毒性特性. 那些通过三级筛选的候选药物然后进入基于动物的研究, 但这项研究现在需要更少的动物, 因此可以构建为小型验证性研究，以满足FDA（或其他监管机构）的要求. Also, 通过在人体临床研究开始之前进行基于人体组织的三级研究, 基于动物研究结果的跨物种外推错误的可能性也大大减少.

在购买体外人体组织等效物之前, 您可以从我们的每个人体组织等效物中购买纯化的总RNA（对照和处理）和/或蛋白裂解物（对照），以确认特定基因的表达水平或特定蛋白质的存在/缺失。.

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From the ICCVAM Web site: "国家环境卫生科学研究所（NIEHS）所长于1997年成立了验证替代方法机构间协调委员会（ICCVAM），以执行NIEHS在公法中的指令.L.) 103-43. 该法律指导NIEHS开发和验证新的测试方法, 并建立标准和程序，验证和监管机构接受毒理学测试方法. P.L. 2000年ICCVAM授权法案第106-545条将ICCVAM设立为常设委员会. The Committee is composed of representatives from 15 Federal regulatory and research agencies; these agencies generate, use, 或提供用于风险评估的毒性试验方法的信息. 委员会协调与发展有关的跨机构问题, validation, acceptance, 以及国家/国际毒理学测试方法的统一.”

From the ECVAM Web site: “欧洲替代方法验证中心（ECVAM）是根据委员会1991年10月给理事会和议会的来文设立的, 根据86/609/EEC指令凯发体育最新版保护用于实验和其他科学目的的动物的要求, 这就要求欧委会和各成员国积极支持这一发展, 可以减少的方法的验证和接受, 改进或替代实验动物的使用. ECVAM成立于1992年，是环境研究所的一个单位, 是联合研究中心的一部分, and was transferred, at that time, 新成立的Ispra健康和消费者保护研究所, Italy in 1998.”

替代方法的整个验证过程可能需要8-10年. 该过程的科学部分（正式的预验证和验证研究）通常需要4-6年.

凯发体育最新版有两种正式验证的替代方法-表皮 skin irritation testing and for dermal corrosion testing. 其他几个人已经完成了该过程的主要部分-由高露洁棕榄赞助的用于眼部刺激的EpiOcular测试（Draize兔子眼睛测试的替代方案）, 和表皮进行经皮吸收试验.